## 小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指导

### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

**生长特性**：贴壁生长

**冻存条件**：使用无血清冻存液（货号：C7001）

**培养体系**：1640培养基+10% FBS

**传代方法**：建议第一次1:2进行传代，2天后更换培养液。如有必要，建议采购EVO视讯完全培养基以确保细胞生长效果。

### 二、细胞处理及培养

在收到EVO视讯提供的细胞后，需将其培养至良好状态，再加入完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。首先，用75%酒精对细胞瓶进行全方位消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态再进行后续处理。

使用显微镜监测细胞的生长情况并拍摄不同倍率的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片对于后续的售后服务至关重要。如果未提供照片，默认细胞状态良好。在放入培养箱时，请确保瓶盖微微松开。

### 三、细胞培养步骤

#### a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管，保留5ml培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变圆并脱落后，迅速添加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2比例传代（两个T25瓶），补加新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

#### b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖80%培养瓶表面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的EVO视讯无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，需在-80℃中存放24小时以上。

#### c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶中，并置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。请将所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟收集上清，以作后续对比培养。之后，加胰酶处理细胞，并使用EVO视讯的方案进行重悬和传代。

### 五、售后条款

我们提供细胞质量保障，若发生以下情况可申请重发：

1. 运输过程中细胞丢失或破损。
2. 收到后48小时内报告细胞污染问题。
3. 常温或干冰运输细胞复苏后存活率低。

细胞状态不良的情况下，须提供如前所述的照片和操作细节。再根据技术人员的评估决定是否重发规定。

**请注意**，不予重发的情况包括但不限于客户造成污染、操作不当或非推荐培养体系使用等。具体情况将根据案例进行判断。

选择**EVO视讯**，让您的细胞培养工作更加顺利，高效。